温度时间及125I-AS浓度对ECV304细胞AS受体内化的影响

目的探讨温度、时间及125碘-血管抑素（125I-angiostatin,125I-AS)浓度等因素对人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞血管抑素（angiostatin，AS）受体内化的影响。方法利用弹性蛋白酶有限水解法制备AS，SDS-PAGE凝胶电泳鉴定，Ch-T法进行125I标记，纸层析法测标记率，Sephadex-G50柱纯化，将纯化产物分别加入牛血清白蛋白(BSA)、生理盐水及不同物质的量比的半胱氨酸，以观察其体外稳定性。利用放射性配基结合分析法，以125I-AS为放射性配基，于4、24、37℃条件下，固定浓度125I-AS与ECV304细胞共同保温不同时间后，分别检测细胞的受体内化率；37℃条件下，不同浓度125I-AS与ECV304细胞共同保温不同时间后，分别检测细胞的受体内化率。结果蛋白水解产物凝胶电泳相对分子质量为38×103，标记率可达85%，标记产物在体外较稳定。4℃时，受体内化率较低，24℃时，受体内化率有所增加，37℃时，受体内化率较高；37℃时，随125I-AS浓度增大，受体内化率降低（P<0.01）；不同温度、浓度时，受体内化率均随时间延长而增加（P<0.01，P<0.05）。结论ECV304细胞AS受体内化受温度、时间及125I-AS浓度等因素影响，呈温度-效应、时间-效应关系，与125I-AS浓度呈负相关。