干扰组蛋白乙酰化引发间充质干细胞心肌定向分化特定蛋白的异常表达

目的利用组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5shRNA重组质粒转染经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导后的间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）并检测心肌早期发育相关结构和功能蛋白表达情况，探讨组蛋白乙酰化修饰在MSCs定向分化过程中的调控作用。方法①以组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5为靶点，用带绿色荧光蛋白（greenfluorescenceprotein，GFP）基因的pGenSil-1作为载体，构建Gcn5shRNA质粒。②MSCs体外扩增，5-aza诱导后，不同的时间点用脂质体包载Gcn5shRNA共转染大鼠MSCs，24h后相差显微镜下观察细胞生长状况，电镜下观察染色质的形态变化，采用Westernblot法分别检测Gcn5、心肌结构重链蛋白(myosinheavychain，MHC)和连接蛋白（Connexin43,Cx43）的表达状况。结果电镜示经通用阴性质粒HK转染的MSCs细胞，形态与正常MSCs无明显差别，染色质仍以边集状态为主；经干扰质粒转染的MSCs细胞在形态上与正常MSCs细胞无明显差别，但其染色质出现明显的浓缩紧密现象。以β-actin为内参，比较干扰组和阴性对照组Gcn5、Cx43、MHC蛋白，计算出沉默效率分别为86%、58%和67%。结论转染Gcn5shRNA质粒可干扰组蛋白乙酰化平衡，进而影响MSCs体外分化中心肌发育特定蛋白的表达。