人乳腺癌细胞HYAL1基因真核表达载体的构建及其在MCF-7和ZR-75-30细胞中的表达

目的构建人乳腺癌HYAL1基因的真核表达载体并稳定转染HYAL1基因低表达的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞株，为进一步探讨HYAL1基因在乳腺癌的侵袭和转移中的作用奠定基础。方法采用RT-PCR技术从高表达HYAL1的人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S中扩增透明质酸酶HYLAL1基因,并将其插入真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中，构建的重组表达质粒经脂质体介导转染HYAL1基因低表达的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞。结果用RT？PCR成功地扩增出1条1332bp的DNA片段，经限制性内切酶酶切分析和DNA测序证明已经成功构建了人乳腺癌HYAL1基因的真核表达载体。RT-PCR证明转染了重组质粒的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞可以高效稳定的表达HYAL1基因，且其穿透细胞外基质的能力增强。结论成功构建了人乳腺癌HYAL1基因的真核表达载体，获得了稳定表达人HYAL1基因的MCF-7和ZR-75-30细胞克隆，且其侵袭能力增强。