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ISSN: 2333-9721
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人重组蛋白P311的原核表达纯化与鉴定

, PP. 19-22

Keywords: P,原核表达,增生性瘢痕

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Abstract:

目的原核表达人增生性瘢痕新候选相关蛋白P311,并对该重组蛋白进行纯化、鉴定。方法通过PCR方法扩增人P311基因,利用BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点将其克隆至谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-s-transferase,GST)融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-5-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,用SDS-PAGE、Westernblotting等方法鉴定表达产物,并用谷胱甘肽-琼脂糖小珠亲和纯化表达的GST-P311蛋白。结果重组载体pGEX-4T-P311经酶切与测序鉴定证实构建成功。导入大肠杆菌进行表达,表达产物相对分子量为34KD左右,与预期值相符。该条带经免疫印迹检测鉴定为GST抗体阳性,获得了纯化的GST-P311蛋白。结论构建了pGEX-4T-P311原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,亲和纯化获得较高纯度的GST融合蛋白,为下一步继续研究P311的生物学功能奠定了基础。

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