马兜铃酸对人肾小管上皮细胞损伤的体外实验研究

目的研究马兜铃酸（aristolochicacid，AA）对人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）的损伤及可能机制。方法将细胞分为4组：正常对照组与AA30、60、120μmol/L组（n=6），分别作用于HK-2细胞培养48h后，倒置相差显微镜观察细胞形态，CCK8试剂盒（CellCountingKit-8）检测增殖，流式细胞仪检测凋亡，Westernblot分析激活型Caspase-3的表达，全自动生化检测仪测定上清液中乳酸脱氢酶（LDH）和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG酶）的含量，激光共聚焦扫描荧光显微镜（laserscanningconfocalmicroscope，LSCM）观察α-平滑肌肌动蛋白（smoothmuscleactin，α-SMA）和E-钙黏连蛋白（E-cadherin）的表达，ELISA测定上清液中转化生长因子-β1（transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1）和Ⅲ型胶原的分泌。结果HK-2分别在30、60、120μmol/LAA作用48h后，出现增殖抑制，凋亡增加，激活型Caspase-3表达增多，LDH和NAG酶升高，均呈剂量依赖性。60μmol/L浓度的AA还表现E？cadherin表达减弱，α-SMA表达增强，TGF-β1和Ⅲ型胶原分泌明显增加(P<0.05)。结论AA可引起HK-2细胞明显的增殖抑制、凋亡和上皮-间充质转分化呈一定的浓度依赖性。