人肝再生增强因子对体外单个核细胞PKCα-NF-кB及I-2的影响

目的观察人肝再生增强因子（humanaugmenterofliverregeneration，hALR）对人外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcell，PBMC）PKCα-NF-κB及IL-2的影响，探讨hALR免疫抑制机制。方法用梯度离心法分离正常人PBMC，分成正常对照组、刀豆蛋白A（ConA）刺激组（ConA组）和hALR干预组（ConA+hALR组）。ConA组用5μg/mlConA刺激细胞增殖和分泌细胞因子IL-2；ConA+hALR组用30μg/mlhALR对ConA刺激进行干预。于细胞培养0、8、16、32、40h时，用MTT法测定细胞增殖程度，Westonblot检测细胞内信号通路PKCα-NF-κB表达含量，Fluo-3AM装载检测胞内钙离子浓度，用双抗夹心酶联法检测上清细胞因子IL-2含量。结果ConA组细胞增殖逐渐加强，16h时与正常对照组比较具有统计学意义（P<0.05）；PKCα、NF-κB表达上调及上清IL-2含量增加趋势一致，在16h达到高峰（P<0.05）。ConA+hALR组细胞没有增殖，PKCα-NF-κB表达及上清IL-2含量最高峰后移至32h。每个时间点各组细胞内Ca2+浓度没有差别。结论hALR可能通过抑制PKCα-NF-κB通路阻碍IL-2的产生速度进而抑制免疫。