膜电位及MAPK磷酸化在飞燕草素抑制Ox-LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤中的作用

目的观察飞燕草素（Delphinidin-3-glucoside，Dp-3-glc）对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导的血管内皮细胞株EA.hy926的氧化应激损伤、细胞膜电位和线粒体膜电位改变及p38MAPK磷酸化的影响，探讨其抑制内皮细胞氧化应激的分子机制。方法不同浓度（25、50、100、200μmol/L）的Dp-3-glc预处理内皮细胞2h后，Ox-LDL（100μg/ml）继续处理24h，MTT法检测细胞活力；细胞培养上清液LDH、NO、MDA水平及细胞匀浆SOD酶活性采用试剂盒分别检测；荧光探针DCFH-DA标记细胞内活性氧（ROS）、膜电位敏感的阳离子荧光探针DiSC3(5)和阴离子荧光探针DiBAC4(3)分别标记细胞膜电位，罗丹明-123标记线粒体膜电位，激光共聚焦显微镜分别检测荧光强度；Westernblot法检测细胞内p38MAPK的磷酸化水平。结果Dp-3-glc能明显抑制Ox-LDL诱导的内皮细胞MDA和LDH生成增加、NO分泌减少及细胞内SOD酶活力降低，并显著减少细胞内活性氧（ROS）生成。实验发现Ox-LDL能明显诱导细胞膜电位升高和线粒体膜电位下降，及增强膜电位相关的p38MAPK的磷酸化水平，而Dp-3-glc预处理能明显减弱Ox-LDL诱导的膜电位改变，并抑制p38MAPK的磷酸化。结论Dp-3-glc可能通过影响细胞膜电位、线粒体膜电位及膜电位相关的p38MAPK的磷酸化水平，削弱Ox-LDL诱导的内皮细胞氧化应激损伤。