5-氮胞苷诱导外源表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的研究

目的研究在单层培养条件下，5-氮胞苷（5-azacytidine,5-aza）诱导表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的可能性和效率。方法实验分为实验组和对照组，实验组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞，对照组为P19细胞。2组细胞均在单层培养条件下，以5-aza（1μmol/L）诱导。倒置显微镜观察细胞的生长状态；诱导4、8、12、16d，Westernblot检测α-sarcomericactin和cTnT的表达；并用免疫荧光双标检测α-sarcomericactin和cTnT的共表达。结果实验组和对照组细胞在5-aza诱导下，生长缓慢，死亡细胞数目增多。随贴壁细胞密度增加，形成类似于聚集体贴壁生长的状态，中心细胞小、密集，周边细胞呈放射状排列，胞体长梭形，伸出突起。实验组诱导8、12、16d检测到α-sarcomericactin和cTnT2种蛋白的表达和共表达，表达量呈增多趋势；诱导12、16d时α-sarcomericactin的表达量与8d比差异有统计学意义（P<0.01），诱导16d的表达量与12d比差异有统计学意义（P<0.01）；cTnT在诱导12、16d的表达量与8d比差异有统计学意义（P<0.01）。对照组没有2种蛋白的表达和共表达。结论5-aza可诱导单层生长的表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化。