甲型流感病毒空斑形成技术的改进和应用

目的改进测定甲型流感病毒株和临床样本病毒滴度的空斑形成方法。方法在12孔板按照不同感染复数(MOI)感染MDCK细胞，覆盖改良营养物（含0.8％琼脂糖，0.005％DEAE，0.2％BSA，1.25μg/mlTPCK），孵育一定时间后固定染色，计算空斑形成单位。以空斑形成法和血凝滴度同时测定感染1～6d后培养液病毒滴度。结果甲1型流感病毒PR8株可形成直径1～3mm的圆形或类圆形空斑，滴度达1×107空斑形成单位；临床标本病毒滴度为5×103～1.2×107PFU/ml；PR8株最佳扩增感染复数为0.01,高峰期为感染后第4天。结论该方法经改进可应用于标准病毒株及临床样本的病毒定量检测和确定流感病毒最佳感染复数；低MOI感染复数易于获得高滴度流感病毒。