RAI16基因真核表达载体的构建及在HepG2中的表达

目的构建人视黄酸诱导蛋白16（retinoicacidinduced16，RAI16）与增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP)的融合基因真核表达载体pEGFP-C1-RAI16，使RAI16-EGFP融合蛋白在人肝癌细胞株HepG2中得到表达。方法采用PCR技术，从含有目的基因的质粒克隆模板中钓取并扩增出RAI16全长编码基因，构建RAI16与EGFP的融合基因真核表达载体pEGFP-C1-RAI16，用脂质体转染技术将pEGFP-C1-RAI16导入HepG2，激光共聚焦分析RAI16亚细胞定位及Westernblot检测RAI16-EGFP融合蛋白的表达。结果经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实，RAI16基因已正确插入pEGFP-C1中EGFP基因的下游，获得融合基因表达载体pEGFP-C1-RAI16。将pEGFP-C1-RAI16导入HepG2细胞24h后，激光共聚焦分析显示RAI16-EGFP融合蛋白主要表达于细胞质内。Westernblot结果显示，转染pEGFP-C1-RAI1624、48h和72h后，RAI16基因在蛋白水平的表达逐渐增高，而AFP的表达逐渐下调。结论成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-RAI16，并在HepG2细胞中进行了表达。