人类乳头瘤病毒16E7真核表达载体构建及对A431皮肤鳞癌细胞增殖和侵袭的影响

目的构建HPV16E7（E7）真核表达载体，观察E7过表达对A431细胞增殖和侵袭的影响。方法从Caski细胞中抽提总RNA，针对E7序列设计特异引物，进行逆转录和聚合酶链式反应扩增得到E7cDNA。应用基因工程方法将得到的PCR片段克隆至真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点。重组质粒经双酶切鉴定和测序后，使用LipofectamineTM2000转染A431细胞。Westernblot检测E7在细胞中的表达。WST-1和Transwell系统分别检测细胞增殖和侵袭能力。流式细胞术检测转染前后细胞周期的变化。ELISA检测TGF-β分泌情况。结果经酶切、测序鉴定，E7基因正确插入到pEGFP-N1多克隆位点，获得pEGFP-E7；Westernblot检测结果显示：与未转染组相比，转染组E7蛋白高表达。过表达E7的A431细胞增殖和侵袭能力均显著增强，细胞周期中S期细胞数量增多，G1期细胞数量相对减少。TGF-β分泌增多。结论E7过表达可改变细胞周期，提高皮肤鳞癌细胞的增殖和侵袭能力，而分泌增多的TGF-β并不能抑制肿瘤的增殖和侵袭。