MHC-Ⅰ荧光四聚体载体的构建及其真核表达

目的构建MHC-Ⅰ荧光四聚体真核表达质粒，并表达、纯化该蛋白，以更简便地检测特异性T细胞。方法运用分子克隆技术，构建sKb-ZsGreen-6×His标签的融合蛋白真核表达质粒，转染293FT细胞表达，并以镍亲和层析法纯化。结果经酶切及测序鉴定证实成功构建了MHC-Ⅰ荧光四聚体真核表达质粒并完成表达、纯化，并经SDS-PAGE电泳证实。结论得到了纯化的MHC-Ⅰ荧光四聚体，并经流式细胞术证实其与β2-微球蛋白、OVA肽结合后能被B3Z细胞识别，为特异性T细胞检测提供了一种更方便的方法。