推定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位的DNA结合能力检测

目的检测理论推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位（pap3p01基因）编码蛋白对特异性DNA的结合能力。方法通过PCR从噬菌体PaP3基因组扩增出pap3p01基因，克隆至表达载体pQE31，转化入大肠杆菌JM109后，IPTG诱导表达目的蛋白，超声裂菌后发现目的蛋白质H6-PaP3P01存在于上清中，进而利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白。利用PCR与酶切方法获取可能含有末端酶小亚单位结合位点的DNA片段，并对其3′端进行生物素标记。最后采用凝胶迁移率改变实验检测H6-PaP3P01的DNA结合能力。结果成功构建了pQE-PaP3P01表达载体，获得的融合蛋白H6-PaP3P01表达量较高且全部存在于菌体超声后的上清中。经亲和层析初步纯化及脱盐处理后，H6-PaP3P01可与263bp特异性DNA片段结合。结论成功构建并表达了推定的PaP3末端酶小亚单位重组蛋白H6-PaP3P01，并且检测到了该蛋白质对特异DNA的结合能力，初步证实了理论推定的正确性，为完善PaP3噬菌体包装机制的研究奠定了基础。