钟基因Per2对白血病K562细胞增殖、分化、凋亡的影响及其机制研究

目的研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞，用G418筛选出Per2稳定表达细胞株。瑞氏染色观察细胞形态，台盼蓝拒染法和MTT法检测K562细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期和凋亡,电镜观察细胞凋亡，RT-PCR及Westernblot方法检测该细胞株中增殖、凋亡相关基因p53、cyclinB1和c-myc等的表达。结果筛选到稳定表达Per基因的稳定表达细胞株K562/Per2细胞，与空载体转染组及未处理对照组细胞相比，K562/Per2细胞体积缩小，但是分化不明显；台盼蓝拒染法和MTT实验发现Per2抑制细胞生长与增殖能力；流式细胞仪检测周期结果K562/Per2细胞中G2期细胞增多[转染组(36.1±5.5)%,空载组(12.5±2.9)%,未处理对照组(9.7±2.3)%,P<0.05]，凋亡检测显示转染组细胞凋亡明显增加[14.8%P<0.05]；电镜结果显示染色质浓集、断裂，核固缩和凋亡小体；RT-PCR及Westernblot显示Per2明显上调p53基因的mRNA和蛋白表达，而抑制cyclinB1、c-myc基因mRNA和蛋白的表达。结论钟基因Per2能抑制K562细胞的生长和增殖，并诱导其发生凋亡，但对分化无明显作用。其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控并阻止细胞周期进程来实现的。