HSP70siRNA对宫颈癌HeLa细胞HSP70表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的通过体外实验观察HSP70的小分子干扰RNA（smallinterferingRNA,siRNA）对宫颈癌HeLa细胞株增殖及凋亡的影响，探讨HSP70在HeLa细胞增殖和凋亡中的功能。方法针对HSP70基因设计siRNA序列，克隆到空载体pTZU6+1中，转化DH5α菌株，提取质粒，进行酶切鉴定和测序分析。在脂质体2000的介导下转染HeLa细胞，同时转染空载体为阴性对照及不加任何试剂的空白对照。转染48h后，应用半定量RT-PCR,Westernblot检测HeLa细胞HSP70mRNA及蛋白的表达情况；MTT法检测HeLa细胞的生长抑制率；AO/EB染色法观察HeLa细胞形态学变化；流式细胞术检测HeLa细胞的凋亡率和细胞周期分布情况。结果与对照组相比，转染pHSP70-siRNA组HSP70的mRNA及蛋白表达均明显下降（P<0.01）,表明Phsp70-siRNA质粒转染能有效降低HSP70的表达；细胞生长抑制率明显增高（P<0.05），且在48h时细胞抑制率达到最大；在荧光显微镜下观察到HeLa细胞出现凋亡形态；流式细胞术结果显示pHSP70-siRNA组细胞凋亡率显著高于对照组，且G0/G1期细胞减少，G2/M和S期细胞增多。结论HSP70siRNA可以有效抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，促进HeLa细胞凋亡；HSP70可能成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点。