抗炎、抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5表达载体的构建及其功能研究

目的构建一种具有抗炎和抗凝双效功能的融合蛋白，并对其功能进行初步鉴定。方法将重组金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5(staphylococcalsuperantigen？likeprotein-5,SSL5)与蜱抗凝血肽(tickanticoagulantpeptide,TAP)融合，从金黄色葡萄球NCTC8325菌株中克隆SSL5基因；经DNA重组技术，将编码pelB前导序列、SSL5和TAP的基因重组并克隆于原核表达载体pHOG21中，再转染于大肠杆菌BL21中扩增表达，制备融合蛋白SSL5-TAP或TAP-SSL5，采用流式细胞仪检测融合蛋白是否和SSL5一样，具有与粒细胞表面P-选择素糖蛋白配体-1(P-selectinglycoproteinligand-1,PSGL-1)结合的特性；采用反应底物法在体外检测融合蛋白对活化的凝血因子X（factorXa，FXa）活性的抑制作用。结果TAP-SSL5保留了SSL5与PSGL-1结合的特性,并且融合蛋白TAP-SSL5可显著抑制FXa的活性(P<0.01)，抑制率达39.5%。结论融合蛋白TAP-SSL5是一种以PSGL-1为靶向的新型抗炎、抗凝双效分子。