新型穿膜肽作为基因运输载体的实验研究

目的人工设计合成穿膜肽新序列（CGRLWMRWYSPWARRYGC），并于体外考察其作为基因载体的潜力。方法采用Na-芴甲氧羰基(Fmoc)法固相合成穿膜肽新序列，并用异硫氰酸荧光素（FITC）标记N端。高效液相色谱及质谱仪检测其纯度及相对分子质量，流式细胞仪及共聚焦显微镜观察其穿膜能力，荧光显微镜和流式细胞仪观察其携带增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)进入细胞表达情况，MTT评价穿膜肽与质粒复合物的细胞毒性，琼脂糖凝胶电泳检测穿膜肽与质粒的亲和力及对质粒的保护作用。结果合成的穿膜肽纯度为96.13%，相对分子质量为2348.42，流式细胞仪检测显示荧光阳性细胞平均约占98.81%，共聚焦显微镜可见荧光标记的穿膜肽分布于细胞内；穿膜肽携带质粒在人脐静脉内皮细胞中的表达率平均约为11.44%；不同电荷比的复合物对细胞的活性没有明显影响（P>0.05）；琼脂糖凝胶电泳显示当穿膜肽与质粒的电荷比大于2∶1时，质粒不能迁移出来，电荷比为4∶1、8∶1和16∶1的复合物能够抵抗DNA酶Ⅰ的消化作用，以8∶1最为明显。结论人工设计合成的新型穿膜肽能够作为一种潜在的基因运输载体。