乙肝病毒X基因参与肝细胞脂肪变性的作用及机制的初步研究

目的探讨沉默HBx基因对HepG2.2.15细胞脂质代谢相关基因表达的影响。方法设立空白对照组（HepG2.2.15细胞）、阴性对照组（HepG2.2.15细胞转染阴性HK质粒）、shHBx转染组（HepG2.2.15细胞转染shHBx质粒）和HepG2组（HepG2细胞）。构建针对HBx基因的shHBx质粒，转染HepG2.2.15细胞，荧光显微镜及Westernblot检测转染质粒24～96h绿色荧光蛋白和HBx蛋白的表达以确定质粒的最佳干扰时间，根据结果予油酸钠刺激细胞，甘油三酯（TG）检测细胞脂肪变程度，RT-PCR检测固醇调节元件结合蛋白(sterolregulatoryelementbindingprotein-1c，SREBP-1c)mRNA的表达，Westernblot检测肝X受体α(liverxreceptoralpha，LXRα)及脂肪酸合成酶(fattyacidsynthase，FAS)蛋白的表达。结果成功构建shHBx质粒并转染HepG2.2.15细胞；与空白对照组和阴性对照组比较，shHBx转染组HBx蛋白表达明显下降，于转染后48～72h表达最低[（0.337±0.042）vs(0.577±0.032)，(0.333±0.032)vs(0.654±0.049)，P<0.01]，差异有统计学意义；随着油酸钠处理时间延长，各组TG含量、SREBP-1cmRNA水平、LXRα和FAS蛋白表达均逐渐增加，与空白对照组和阴性对照组比较，同一时间点，shHBx转染组和HepG2组中表达较低[TG：（26.51±1.98）μg/mgvs（37.16±6.32）μg/mg；SREBP-1c：0.418±0.051vs0.516±0.037；LXRα：0.463±0.047vs0.630±0.026；FAS：0.463±0.047vs0.630±0.017，P<0.01]，差异有统计学意义，而shHBx转染组与HepG2组相比水平近似，差异无统计学意义（P>0.05）。结论HBx在HepG2.2.15细胞脂变中具有重要作用，可能通过调节LXRα、FAS、SREBP-1c表达影响肝细胞脂代谢。