SPIO、GFP双重标记猪骨髓间充质干细胞的研究

目的研究超顺磁性氧化铁（superparamagneticironoxide,SPIO）、绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）双重标记猪骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs）的可行性。方法用慢病毒载体介导的GFP基因感染第3代猪BMSCs，并用SPIO标记。用荧光显微镜观察双标记BMSCs，流式分析GFP转染效率，普鲁士蓝染色、透射电镜鉴定SPIO标记效率。MTT法检测标记BMSCs的细胞增殖活力。结果双标记BMSCs在荧光显微镜下发出绿色荧光，GFP在基因转染1d后开始表达，3d明显增加，5d达顶峰，以后稳定表达。普鲁士蓝染色显示SPIO标记的BMSCs内有大量蓝染铁颗粒，细胞标记率达95%以上，透射电镜下细胞质内及部分次级溶酶体内可见高电子密度含铁囊泡和细小颗粒。MTT法检测发现GFP和SPIO双标记、单纯GFP标记、SPIO标记BMSCs的增殖活力与未标记BMSCs相比无改变（P>0.05）。结论携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒和SPIO可以有效地标记猪的BMSCs。双标记BMSCs的活性、增殖能力与未标记BMSCs相比无改变。