沉默缺氧诱导因子对人胶质瘤SHG44细胞糖酵解及细胞增殖的影响

目的探讨沉默缺氧诱导因子（hypoxia-induciblefactor-1alpha,HIF-1α）对缺氧状态人胶质瘤SHG44细胞糖酵解及细胞增殖的影响及机制。方法用氯化钴(CoCl2)模拟缺氧，并应用小分子RNA干扰（siRNA）技术沉默HIF-1α基因表达。将细胞分成4组：正常培养组、缺氧培养组、阴性对照组和siRNA干扰组。各组又分为常糖组（2g/L）和高糖组（5g/L）。Real-timePCR、Westernblot法分别检测肿瘤细胞HIF-1α和糖酵解酶的mRNA及蛋白表达；生物发光法检测细胞内ATP水平；激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位；MTT法检测细胞增殖；流式细胞技术检测细胞凋亡、坏死及细胞内活性氧的变化。结果①缺氧条件下，HIF-1αsiRNA干扰沉默HIF-1α基因的效率达到71%。②缺氧培养组HIF-1α和糖酵解酶的mRNA和蛋白表达高于正常培养组（P<0.05）,细胞内ATP水平减少、细胞坏死和凋亡均增加，而细胞增殖能力明显增强（P<0.05），同时线粒体膜电位升高（P<0.05）。③siRNA干扰组HIF-1α和糖酵解酶的表达量低于缺氧培养组、阴性对照组（P<0.05）；ATP水平低于缺氧培养组，细胞增殖率下降（P<0.05），细胞坏死率高于缺氧培养组（P<0.05），线粒体膜电位恢复。结论缺氧诱使肿瘤细胞表达HIF-1α，促进肿瘤恶性进展；siRNA干扰沉默HIF-1α能加重缺氧状态下SHG44细胞的生长抑制和坏死，其机制与抑制糖酵解、恢复线粒体功能有关。