蛋白激酶C在人骨肉瘤细胞多药耐药中的作用及机制

目的研究蛋白激酶C（PKC）主要亚型在人骨肉瘤143B细胞中的表达情况及其与143B细胞耐药的关系。方法采用Westernblot法检测PKC主要亚型α、β和γ磷酸化形式p-PKCα、p-PKCβ、p-PKCγ和多药耐药蛋白-1（mutidrugresistanceprotein-1，MDR-1）在人骨肉瘤143B/WT野生型细胞和143B/ADM耐药细胞中的表达水平，通过PKC特异性抑制剂staurosporine抑制PKC对MDR-1蛋白表达的影响；CCK法检测药物敏感性；荧光分光光度计法检测细胞内阿霉素浓度，流式细胞术检测细胞凋亡水平和细胞外排罗丹明水平。结果相对于143B/WT野生型细胞，143B/ADM耐药细胞中p-PKCα表达显著增加，而p-PKCβ和p-PKCγ表达则无明显差异，同时143B/ADM耐药细胞中MDR-1表达也明显上调；143B/ADM耐药细胞对阿霉素的耐药指数为15.7，而加入staurosporine抑制143B/ADM细胞PKC表达后，细胞耐药指数下降为5.5（P<0.01）；143B/ADM耐药细胞接受ADM处理后，细胞凋亡率为（28.41±4.33）%，而其PKC表达被抑制后，细胞内阿霉素浓度增加的同时（P<0.01），细胞凋亡率增加为（70.63±4.80）%（P<0.01），外排罗丹明减少，同时MDR-1蛋白表达明显下调。结论人骨肉瘤耐药细胞中过表达的PKCα可通过调控MDR-1参与骨肉瘤耐药。