沉默PeroxiredoxinⅠ基因增强乳腺癌细胞放射敏感性及其作用机制的实验研究

目的采用RNA干扰技术沉默过氧化物酶Ⅰ（peroxiredoxinⅠ，PrxⅠ）基因，观察乳腺癌MCF-7细胞对X线敏感性变化,探讨其作用机制。方法将PrxⅠshRNA真核表达载体pGPU6-PrxⅠ和阴性对照质粒pGPU6-HK转染入乳腺癌MCF-7细胞中，经G418稳定筛选后RT-PCR和Westernblot检测PrxⅠ表达变化。6MVX线照射6Gy后48h,流式细胞术检测细胞的活性氧水平、细胞周期和细胞凋亡；MTT法测定细胞增殖能力；克隆形成实验观察克隆形成率，计算Do、N、Dq、SF2及放射增敏比(sensitiveenhancementratio，SER)等放射生物学参数，Westernblot法检测Rad51及γ-H2AX蛋白变化。结果获得2个稳定转染细胞株：pGPU6-HK和pGPU6-PrxⅠ。RT-PCR和Westernbolt检测显示pGPU6-PrxⅠ组中PrxⅠmRNA和蛋白表达均明显抑制。6Gy的X线照射48h后，pGPU6-PrxⅠ及联合照射（ionizingradiation，IR）组细胞中的活性氧水平、G1期细胞和细胞凋亡明显增加，而细胞增殖能力和S期细胞明显降低，Westernblot分析表明Rad51蛋白表达降低，而γ-H2AX蛋白表达升高(P<0.05)，以pGPU6-PrxⅠ+IR组变化最显著，其Rad51蛋白表达下降了79.3%，而γ-H2AX蛋白表达升高了3.7倍。pGPU6-PrxⅠ组细胞的Do、N、Dq和SF2值分别为1.354、3.106、1.547和0.504，均低于pGPU6-HK组,SF2时的SER为1.353。结论下调PrxⅠ基因表达可提高乳腺癌MCF-7细胞的放射敏感性，其作用机制与细胞内活性氧清除能力减弱、DNA双链断裂增加及DNA损伤后修复能力降低有关。PrxⅠ可能是1个理想的肿瘤放射增敏分子靶点。