TLR4／MyD88信号通路在树突状细胞-肾癌786-0细胞株融合瘤苗中的作用

目的探讨TOLL样受体4(toll-likereceptor4,TLR4)/髓样分化因子88（myeloiddifferentiationfactor88，MyD88）信号通路在树突状细胞(dentriccell,DC)-肾癌786-0细胞融合瘤苗中的变化及作用。方法用正常人外周血诱导不成熟的树突状细胞(immaturedentriccell,imDC),利用聚乙二醇法(PEG)制成imDC-肾癌-786-0细胞融合瘤苗；用透射电镜观察imDC融合前后变化情况；RT-PCR检测单纯imDC组，肾癌786-0细胞组，imDC-肾癌-786-0融合瘤苗组在6、12、24、48h中TLR4及MyD88mRNA变化情况；用激光共聚焦检测imDC中核因子-κB(nuclearfactorkappaB，NF-κB)在融合前后转位情况；流式细胞仪检测imDC在融合前后CD86、HLA-DR变化；噻唑盐（MTT）法检测各组体外刺激T淋巴细胞的增殖能力及刺激的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的杀瘤活性。结果透射电镜显示融合细胞中imDC转变为mDC；TLR4及MyD88mRNA在肾癌中不表达，在单纯imDC中呈低表达（TLR4/β-actin灰度比值0.40±0.03，MyD88/GAPDH灰度比值0.33±0.03）,在融合瘤苗组中6h表达最强（TLR4/β-actin灰度比值0.73±0.18，MyD88/GAPDH灰度比值为0.45±0.18），明显强于各组(P<0.05)，此后在融合细胞中逐渐减弱，48h基本不表达；激光共聚焦显示NF-κB在融合前位于imDC细胞质，融合后转移至细胞核；流式细胞仪提示融合瘤苗HLA-DR、CD86表达分别为81%、80%，明显高于imDC组（63%、59%）及肾癌细胞组(P<0.05)；MTT法示融合疫苗在体外刺激T淋巴细胞增殖能力[D（570）值(1.95±0.22）]强于imDC组(1.31±0.35)及肾癌786-0组（1.28±0.33)(P<0.05)，并且其诱导产生的CTLs对自体肾癌细胞具有显著的杀伤活性。结论TLR4/MyD88-NF-κB信号通路在imDC与肾癌786-0细胞融合过程中促使树突状细胞成熟发挥了非常重要的作用，并且此信号通路能促使树突状细胞功能发生转变。