磁共振报告基因magA的慢病毒载体质粒构建及体外表达

目的构建携带磁共振报告基因magA的慢病毒载体质粒，初步检测其体外转铁效应。方法采用人工DNA合成技术合成目的基因magA，DNA重组技术将magA基因连接入慢病毒表达载体质粒pLenti-EGFP，酶切及DNA测序鉴定重组质粒pLenti-EGFP/magA的准确性。包装、包膜及重组质粒共转染293FT细胞包装慢病毒，收集包被magA基因的慢病毒上清并感染293T靶细胞，细胞培养基内加入500μmol/L枸橼酸铁连续4次传代，荧光显微镜观察并提取细胞行台盼蓝排除实验和普鲁士蓝染色，同时设立对照组行同样方法实验。结果酶切和DNA测序分析证实magA基因准确克隆入慢病毒表达载体设计位点，合成目的基因序列与GenBank中magA序列完全一致。荧光显微镜下观察包装细胞293FT细胞质内有大量绿色荧光表达，病毒滴度达到108Tu/μl。慢病毒感染293T靶细胞后，细胞内稳定表达EGFP，且效率>80%。实验组及对照组台盼蓝拒染率分别为(92.80±2.65)、(93.50±1.29)，2组拒染率差异无统计学意义（P>0.05）。普鲁士蓝染色发现实验组细胞内有大量蓝染铁颗粒形成，对照组呈阴性。结论成功构建了携带磁共振报告基因magA的慢病毒表达载体，证实了magA基因在哺乳动物293T靶细胞内的转铁作用。