GSK3β促进TGF-β1诱导的肾小管上皮HK-2细胞纤维化

目的阐明GSK3β对于肾脏小管间质纤维化的作用。方法以TGF-β1诱导的体外肾小管间质纤维化模型为研究对象，以GSK3β特异抑制剂LiCl处理细胞和不同GSK3β表达质粒（野生型GSK3β表达质粒GSK3β-WT；第9位点上丝氨酸突变为丙氨酸，由此不能再被磷酸化失活而具有固有活性的GSK3β突变质粒GSK3β-S9A；第85、86位点上赖氨酸突变为丙氨酸、失去激酶活性的GSK3β突变质粒GSK3β-KD）转染细胞，观察肾脏纤维化的标志性分子纤维连接素蛋白（fibronectin，FN）表达水平的改变，以及对TGF-β/Smad信号通路的作用。结果LiCl增加HK-2细胞GSK3β的磷酸化，抑制GSK3β的活性，同时降低了细胞基础水平和TGF-β1诱导的FN表达。过表达的GSK3β-WT增强TGF-β1诱导的FN表达，而这种效应在GSK3β-S9A转染细胞更为显著。过表达GSK3β-KD抑制TGF-β1诱导的FN表达。分析对TGF-β/Smad信号通路的作用，LiCl可以抑制TGF-β1诱导的Smad3磷酸化，而对Smad2磷酸化水平无影响。同时，LiCl也不改变Smad3的总蛋白表达。结论GSK3β通过TGF-β1/Smad3信号通路促HK-2细胞纤维化，抑制GSK3β可以抗纤维化。