SIRT1基因沉默诱导肝癌细胞老化及其机制

目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子1（silentinformationregulator1,SIRT1）基因沉默对肝癌细胞老化的影响及机制。方法通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默SIRT1的表达，并通过Real-timePCR和Westernblot验证SIRT1基因的沉默效果。BrdU标记实验检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期变化；β-半乳糖苷酶染色观察肝癌细胞有无老化；Westernblot检测衰老相关基因p53和p21蛋白的变化。结果慢病毒介导的shRNA能显著抑制细胞SIRT1的mRNA及蛋白水平。SIRT1沉默能抑制肝癌细胞的增殖，抑制率达70%～80%；同时，SIRT1沉默能显著诱导G1期细胞周期阻滞：感染shCont的细胞处于G1期比例为(44.29±0.36)%，而感染shSIRT1-1的细胞处于G1期细胞为（69.20±1.24）%，感染shSIRT1-2的细胞处于G1期比例为(65.86±1.75)%。SIRT1沉默后肝癌细胞中衰老相关的β-半乳糖苷酶染色显著增高，阳性细胞占40%～50%（P<0.05），并伴随衰老相关基因p53和p21蛋白表达增加。结论SIRT1基因沉默可能通过p53/p21途径促进细胞衰老。