As2O3在HuH7及CD13+CD133+LCSCs增殖和分化中作用的初步观察

目的观察As2O3对人肝癌细胞系HuH7及CD13+CD133+肝癌干细胞（livercancerstemcells，LCSCs）增殖和分化的作用。方法用荧光激活流式细胞术（fluorescenceactivatedcellsorter，FACS）从HuH7细胞系分选CD13+CD133+LCSCs，MTT和EdU法分析As2O3刺激HuH7及CD13+CD133+LCSCs增殖作用。流式细胞术检测As2O3处理第3、5天HuH7细胞凋亡，和As2O3处理第3天细胞周期变化。Westernblot分析HuH7粒细胞白血病（promyelocyticleukaemia，PML）蛋白表达情况。观察As2O3处理前后HuH7对吡柔比星敏感性和肿瘤球形成能力变化。结果早期（5d）低浓度As2O3促进HuH7和CD13+CD133+LCSCs增殖，高浓度As2O3则抑制CD13+CD133+LCSCs增殖。As2O3然没有阻滞HuH7细胞周期，但使G0/G1期细胞降低2.32%。As2O3处理3d的HuH7细胞凋亡与正常对照HuH7细胞相似，凋亡率在8%～9.5%，第5天使HuH7细胞凋亡率上升到12%～15%，1.0μg/mlAs2O3组晚期凋亡率比0.5μg/mlAs2O3高。As2O3改变HuH7细胞对THP敏感性，还显著降低CD13+CD133+LCSCs成球能力。HuH7细胞表达PML蛋白，As2O3可使HuH7细胞PML蛋表达降低，而且与HuH7细胞和CD13+CD133+LCSCs增殖有刺激作用，HuH7细胞凋亡及CD13+CD133+LCSCs分化结果一致。结论低浓度As2O3不仅刺激HuH7及CD13+CD133+LCSCs增殖，促进HuH7细胞凋亡，而且可能诱导CD13+CD133+LCSCs分化，其作用通过PML蛋白介导。