重组AQP9对L-02细胞脂质沉积的影响

目的构建人水甘油通道蛋白9（aquaglyceroporin9,AQP9）重组质粒，验证其在L-02肝细胞中的表达，并检测其对非酒精性脂肪肝病（nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD）细胞模型的作用。方法从人肝脏组织中提取总RNA，RT-PCR获得AQP9基因，克隆到载体pEGFP-N1上，构建重组质粒pEGFP-N1-AQP9。将其转染L-02细胞，通过荧光显微镜观察其转染情况，RT-PCR和Westernblot检测AQP9基因在细胞中的表达。通过油红O染色，测定甘油三酯、游离脂肪酸及甘油含量，检测其对L-02细胞脂肪变性模型的作用。结果成功构建pEGFP-N1-AQP9重组质粒，并能在L-02细胞中表达，将其转染L-02细胞脂肪变性模型后，油红O染色可见油酸/pEGFP-N1-AQP9转染组较油酸组细胞内脂质含量明显升高，油酸/pEGFP-N1-AQP9转染组细胞内甘油三酯、游离脂肪酸及甘油含量分别为（5.435±0.337）、（2.016±0.144）、（1.485±0.113）mmol/L，而油酸组分别为（3.218±0.220）、（1.538±0.193）、（1.024±0.148）mmol/L，两者之间差异有统计学意义（P<0.01），说明上调AQP9表达量可使其脂肪变性程度加重。结论AQP9异常升高能够引起或加重非酒精性脂肪肝病。