H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

目的获取H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白的多克隆抗血清，制备NS1蛋白的多克隆抗体。方法利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达融合蛋白GST-NS1，采用Glutathione-sepharose4B亲和层析纯化融合蛋白。纯化的GST-NS1蛋白以不同剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠，收集抗血清，采用ProteinA-sepharose和CNBr-sepharose4B亲和层析从抗血清中纯化抗NS1蛋白的多克隆抗体。Westernblot和免疫荧光法鉴定多克隆抗体的特异性，酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗体的效价。结果SDS-PAGE结果表明，融合蛋白GST-NS1以可溶形式表达，诱导4h的表达量占细菌可溶性蛋白的32.6%，融合蛋白的纯度达到90%以上。Westernblot分析显示，亲和层析制备的多克隆抗体对NS1蛋白具有高度特异性。ELISA结果表明，皮下注射25、50、100μgGST-NS1融合蛋白的BALB/c小鼠血清光密度D（450）值均明显增高（P＜0.01），其滴度达到1∶3200。免疫荧光观察到病毒感染的A549细胞中，有内源性NS1蛋白的表达。结论成功地从抗血清中制备出NS1蛋白的多克隆抗体，制备的抗体具有高度特异性。