重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9对小鼠胚胎肝脏干细胞诱导分化的影响

目的探讨重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9（Adv-BMP-9）诱导小鼠胚胎肝干细胞向成熟肝细胞定向分化的影响。方法将已构建的表达BMP-9、肝细胞生长因子(HGF)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒，分别感染小鼠胚胎肝干细胞，诱导其分化，然后采用半定量PCR、Real-timePCR、细胞免疫荧光、荧光素酶报告基因检测等方法检测甲胎蛋白（AFP）、白蛋白(ALB)和细胞角蛋白18（CK18）等肝细胞标志物的表达。结果半定量及Real-timePCR检测，诱导7d后的BMP-9组、HGF组AFP的mRNA表达△△Ct值分别为(0.027±0.003)、(0.023±0.002)，较GFP对照组(0.103±0.018)显著下降，ALB的mRNA表达△△Ct值分别(0.041±0.005)、(0.031±0.001)，较GFP对照组(0.013±0.002)明显升高,CK18的mRNA表达△△Ct值分别(0.094±0.003)、(0.083±0.007)，较GFP对照组(0.040±0.008)明显升高（P<0.05）；细胞免疫荧光染色，诱导7d后的细胞胞浆内表达肝细胞特有的ALB、CK18等蛋白，而对照组几乎无表达；荧光素酶报告基因检测，诱导1、4、7d的BMP-9组、HGF组的ALB表达荧光素酶A值分别[(5509.35±213.08)，(33198.14±666.39)，(50815.03±1730.75)]、[(5539.25±132.62)，(31400.71±2622.39)，(49088.28±1868.03)]，较GFP对照组(4732.49±68.22)，（9407.71±487.84），（20894.83±1100.54)明显升高（P<0.05）。？结论BMP-9有诱导小鼠胚胎肝脏干细胞向成熟肝细胞样细胞分化的作用，并且BMP-9对小鼠胚胎肝干细胞的诱导分化作用甚至和传统的肝干细胞诱导分化因子HGF相当。