4种感染性腹泻病原菌免疫磁珠-多重PCR快速检测体系的建立

目的基于免疫磁珠分离及多重PCR技术建立出血性大肠埃希菌、福氏志贺菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌的快速检测体系。方法根据出血性大肠埃希菌uidA、福氏志贺菌ipaH、空肠弯曲菌hipo及副溶血弧菌tlh的基因序列设计特异性引物，优化免疫磁珠分离过程及多重PCR扩增中的各个环节，建立上述4种病原菌同步快速扩增体系，并鉴定该体系特异性、敏感性。结果发现Mg2+浓度对该体系影响最大，在Mg2+浓度为4mmol/L时扩增效率最高；该体系对4种病原菌的敏感性分别为:出血性大肠埃希菌2.7×10cfu/ml、福氏志贺菌6.4×10cfu/ml、空肠弯曲菌7.6×10cfu/ml、副溶血弧菌3.6×10cfu/ml。结论建立了出血性大肠埃希菌、福氏志贺菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌的免疫磁珠-多重PCR快速检测体系，该体系特异性及敏感性高，检测过程简单，结果稳定，可应用于临床诊断及食品卫生监管中致病菌的快速检测。