HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响

目的构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7，研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响。方法以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板，用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7，并酶切和DNA测序鉴定。用SapⅠ单酶切这两种质粒，获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组，经转染试剂PolyJetTMReagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中。在转染后各时间点Westernblot检测HBx蛋白的表达，Southernblot和Real-timePCR同时检测细胞质DNA复制和细胞核cccDNA的合成，Real-timePCR分析定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录。结果在野生组中可检测到HBx蛋白的表达，而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Westernblot的检测范围。两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异（P>0.05）。而在转染后96hHBx突变组中细胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50%～70%（P<0.05）。结论HBx缺失虽然不影响细胞核HBVcccDNA的合成，但是它能下调细胞质HBVDNA的复制和pgRNA的转录。