HBVX基因转染L02细胞及其蛋白产物对CⅡTA和HLA-DR表达的影响

目的探讨脂质体和电穿孔法在HBVX基因转染L02细胞中的差别及X基因蛋白产物对CⅡTA和HLA-DR表达的影响。方法构建HBVX基因重组表达质粒，通过电穿孔和脂质体法转染人正常肝细胞L02细胞，以绿色荧光蛋白（enhancegreenfluorescentprotein，EGFP）表达水平评价转染效率，流式细胞技术检测L02细胞HBVX蛋白的表达水平。RT-PCR、流式细胞技术及western-blot分析L02细胞、转染空载体以及转染HBVX基因重组表达质粒的L02细胞？CⅡTA？和HLA-DR的表达差别。结果采用阳离子脂质体Lipofectamine2000的转染效率为（6.4±3.5）%，显著低于电穿孔法（41.46±5.8）%，P<0.01。脂质体法转染的L02细胞HBVX蛋白表达水平为(5.1±3.9)%，显著低于电穿孔方法(37.5±4.1)%表达，P<0.01。转染了HBVX基因重组表达质粒的L02细胞检测到CⅡTA和HLA-DRmRNA和蛋白表达，而L02细胞本身及转染空载体的L02细胞未检测到CⅡTA和HLA-DR的表达。结论HBVX基因真核表达载体pHBx-IRES2-EGFP通过电穿孔法转染L02细胞较脂质体法有明显较高的转染效率和更高的目的基因的表达，HBVX基因诱导了L02细胞中CⅡTA和HLA-DR的表达。