过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对胃癌细胞株BGC-823增殖的影响

目的探讨过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ（Golgiα-mannosidaseⅡ，GMⅡ）对人胃癌细胞株BGC-823增殖活性的影响。方法构建真核表达载体EX-E2372-M03，通过脂质体Lipofectamine2000转染至人胃癌细胞株BGC-823，筛选稳定细胞株，用免疫荧光观察转染效率。用RT-PCR法检测转染细胞GMⅡ、c-myc、bcl-2mRNA的表达，用Westernblot法检测转染细胞GMⅡ、c-myc、bcl-2蛋白表达的变化，用MTT法及流式细胞仪检测过表达GMⅡ后对细胞增殖活性的影响。结果GMⅡ真核表达质粒构建成功并成功转染，MTT结果示过表达GMⅡ后胃癌细胞增殖活性明显高于对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示，与对照组相比较，GMⅡ过表达组胃癌细胞G1期细胞明显减少，S期细胞比例明显增加。转染后胃癌细胞GMⅡmRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)，且可明显上调胃癌细胞BGC-823中c-myc的mRNA和蛋白表达水平（P<0.05），但对bcl-2的调节作用不明显。结论过表达GMⅡ能促进胃癌细胞增殖，可能与上调c-myc的表达有关。