核心蛋白聚糖抑制人软骨细胞MMP13基因表达的体外研究

目的体外原代细胞培养人正常关节软骨细胞，观察不同浓度的外源性核心蛋白聚糖（decorin，DCN）对软骨细胞基质金属蛋白酶13（matrixmetalloproteases13，MMP13）表达的影响。方法采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶结合消化法分离培养人透明软骨细胞，观察体外培养的软骨细胞形态，阿尔新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化鉴定透明软骨细胞，从基因水平（实时定量PCR）检测不同浓度的外源性DCN（对照组：0，A组：2.5μg/ml，B组:25μg/ml，C组:250μg/ml）作用下透明软骨细胞对MMP13、X型胶原(CollagenX)表达的影响。结果①正常透明软骨细胞培养呈多角型，扁平状，换液培养5d时，细胞呈多边形、星形等，排列紧密呈“铺石板”样。②本法分离培养的原代透明软骨细胞的阿尔新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化均为阳性。③随着外源性DCN浓度（0～250μg/ml）的不断增大，CollagenX的表达明显降低（P<0.01），且成剂量依赖关系（A：0.78±0.03，B:0.71±0.04，C:0.63±0.01），MMP13的表达则在DCN高浓度组（250μg/ml）时明显降低（0.85±0.02，P<0.01）。结论外源性DCN抑制透明软骨细胞的CollagenX的表达且成剂量依赖关系，高浓度（250μg/ml）对MMP13的表达起明显抑制作用。表明外源性DCN可能通过抑制透明软骨细胞肥大化抑制软骨细胞MMP13的表达。