慢病毒介导BC047440基因沉默逆转HepG2/ADM细胞化疗耐药性机制的探讨

目的利用siRNA方法沉默HepG2/ADM细胞系中BC047440基因，观察其受抑制后对细胞多药耐药性的影响及其分子机制。方法建立BC047440蛋白在HepG2/ADM细胞系siRNA干扰模型，采用Westernblot检测BC047440蛋白的表达；实验分3组：BC047440-shRNA组、control-shRNA组和HepG2/ADM组。CCK-8法分析阿霉素对细胞生长抑制率的影响，流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布；Westernblot检测BC047440沉默后NF-κB蛋白表达的变化；Real-timePCR检测Survivin、CCNL1基因mRNA水平的变化。结果成功建立BC047440蛋白siRNA干扰模型；NF-κB蛋白表达BC047440-shRNA组约为HepG2/ADM组67.69%，约为control-shRNA组67.39%；细胞毒性实验中24、48h阿霉素对BC047440-shRNA组细胞毒性作用明显增强；流式细胞仪检测结果显示BC047440-shRNA组细胞凋亡明显增多，细胞周期分布多停留于G1/G0期，S期细胞明显减少。Real-timePCR检测BC047440-shRNA组Survivin基因mRNA表达约为control-shRNA组37%，约为HepG2/ADM组42%；检测BC047440-shRNA组CCNL1基因mRNA表达约为control-shRNA组3.5倍，约为HepG2/ADM组2.4倍。结论沉默BC047440基因可通过NF-κB信号通路及其下游Survivin、CCNL1信号逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性，提示BC047440基因可能是形成肝癌多药耐药的重要分子之一。