氧糖剥夺、复氧后损伤星形胶质细胞中MMP-9的表达变化与意义

目的通过观察金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9，MMP-9）在氧糖剥夺、复氧培养后损伤星形胶质细胞中基质的表达变化并抑制其活性，探讨其在氧糖剥夺、复氧后细胞损伤中的意义。方法将星形胶质细胞分为正常组、模型组和GM6001组。模型组细胞在无糖DMEM培养基，1%O2的培养条件下行3、5、7h时长的氧糖剥夺后复氧至24h。GM6001组细胞在5h氧糖剥夺、复氧的过程中加入外源性基质金属蛋白酶抑制剂（GM6001，10μmol/ml），复氧至24h。用RT-PCR测定不同时长氧糖剥夺后星形胶质细胞MMP-9mRNA表达变化，ELISA法测定细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度变化；用光学显微镜观察各组的细胞形态变化，LDH漏出率、CCK-8法检测细胞的损伤情况及存活率。结果①RT-PCR及ELISA法检测示：与正常组相比，氧糖剥夺、复氧后，模型组细胞MMP-9mRNA表达量和细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度均有所增加（P<0.05），随着氧糖剥夺时间的延长，均呈现不断上升趋势；②与正常组相比，氧糖剥夺、复氧后，模型组细胞明显损伤，随着氧糖剥夺时间的延长，细胞损伤加重，光镜下细胞出现明显肿胀，并有部分细胞呈凝固性坏死，LDH漏出率不断增高（P<0.01）、存活率则逐渐下降（P<0.05,P<0.01），且培养上清MMP-9蛋白浓度与细胞LDH漏出率的增高程度呈正相关（r=0.693，P<0.05）；与模型组相比，5h氧糖剥夺、复氧后，GM6001组细胞形态学损伤表现明显减轻，LDH漏出率水平也有明显下降（P<0.01），细胞存活率则显著上升（P<0.05）。结论MMP-9过表达可能是氧糖剥夺、复氧后引起细胞损伤的重要因素之一。