沉默CXCR4基因表达抑制胰腺癌增殖和侵袭的体外研究

目的利用RNAi技术构建CXCR4shRNA表达载体，观察CXCR4基因干扰后胰腺癌细胞增殖及侵袭能力的变化。方法在不同分化程度胰腺癌细胞株中筛选出CXCR4高表达胰腺癌细胞株，RNAi技术构建CXCR4shRNA表达载体，转染胰腺癌CXCR4高表达细胞Miapaca-2并应用G418筛选出稳定表达株，Real-timePCR、Westernblot实验观察RNAi对CXCR4基因的抑制效率；MTT实验检测CXCR4基因干扰后胰腺癌细胞增殖，应用Transwell侵袭小室观察CXCR4干扰对胰腺癌细胞侵袭转移力的影响。结果胰腺癌细胞株Miapaca-2CXCR4表达异常增高，特异性CXCR4基因沉默能够在基因和蛋白水平稳定、高效、特异地抑制CXCR4的表达，抑制效率达70%以上。特异性CXCR4shRNA能够抑制细胞生长，细胞达到对数生长期的时间延长(P<0.05)。Transwell实验证明CXCR4基因干扰后细胞侵袭能力减低(P<0.05)，即使SDF-1的刺激也不能够使细胞侵袭能力增加。结论成功构建了针对胰腺癌细胞CXCR4的siRNA载体；CXCR4基因沉默能抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和成瘤能力。