基于舌鳞癌Tca8113细胞醛脱氢酶活性不同构建差异表达基因cDNA文库

目的构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high/lowaldehydedehydrogenaseactivity，ALDHhigh/ALDHlow)细胞差异表达基因cDNA文库。方法用流式细胞仪检测ALDEFLUOR?染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDH的表达，并收集ALDHhigh和ALDHlow细胞；用Trizol分别提取两亚群细胞的总RNA；用抑制性消减杂交（SSH）对2组RNA进行差异基因筛选和扩增，扩增产物与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α。文库扩增后，每库随机挑取24克隆进行酶切、测序及同源性分析。结果分选得到ALDHhigh和ALDHlow两亚群细胞，其中ALDHhigh细胞的比例为2.5%；分光光度计测得ALDHhigh和ALDHlow的RNAD（260）/D（280）的比值分别为1.93和1.92；构建了ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA双向文库，每个库约500个克隆菌落，每库随机挑选24个菌落进行PCR分析，克隆片段均匀分布在200～700bp，无假阳性克隆。测序结果经同源性比对分析和PubMed检索，其中与肿瘤有关的基因有SLC25A13、KLHL2、NPC1、WAPL、BARD1、Notch2、EEF2K。结论成功构建ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA文库。