大鼠肝微粒体法评价20种中药有效成分对CYP2C9酶的作用

目的建立体外大鼠肝微粒体中CYP2C9酶活性测定方法，并以此方法评价20种中药有效成分单体对大鼠CYP2C9酶的作用。方法以双氯芬酸（Diclofenac）为探针，在实验组大鼠肝微粒体孵育体系中加入20种中药有效成分单体，在37℃水浴温孵15min后冰乙腈终止反应，HPLC测定各孵育体系中探针药物的代谢产物4′-羟基双氯芬酸的转化率，并与对照组比较其差异来评价各有效成分对CYP2C9酶活性的作用。结果4′-羟基双氯芬酸、双氯芬酸及其内标香豆素三者分离良好且无其他内源性物质干扰；动力学考察表明双氯芬酸在0.25mg/mL的大鼠肝微粒体体系中孵育15min，测得酶动力学参数Vmax为0.1456nmol/(min？mg)，Km为8.270μmol/L；抑制实验考察发现：黄芩素、蛇床子素、大黄素、獐牙菜苦苷、淫羊藿苷、白藜芦醇实验组中4′-羟基双氯芬酸转化率分别为（402.60±10.58）、（210.90±10.26）、（414.46±10.32）、（509.83±26.45）、（355.44±15.87）、（387.34±22.16）pmol/(min？mg)，显著低于对照组[（735.80±17.27）pmol/(min？mg)，P<0.05]，其他中药成分实验组与对照组比较，其转化率无统计学差异。结论建立了中药有效成分对CYP2C9酶作用的体外大鼠肝微粒体研究方法，并初步评价了黄芩素、蛇床子素、大黄素、獐牙菜苦苷、淫羊藿苷、白藜芦醇对CYP2C9具有抑制作用，在临床联合用药中需注意其可能引起的药物-药物相互作用。