大鼠骨髓间充质干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的标志基因表达受组蛋白乙酰化调控

目的通过骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)与膀胱平滑肌细胞(bladdersmoothmusclecells,BSMCs)接触共培养探讨组蛋白乙酰化对BMSCs分化能力的影响。方法分别采用密度梯度离心法和胶原酶消化法培养大鼠BMSCs及BSMCs至第3代，并对BMSCs进行了鉴定；以单独培养的BMSCs作为对照组，接触共培养的BMSCs为实验组；运用免疫荧光化学染色法分别对2组BMSCs中的平滑肌标志性蛋白平滑肌α肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(smoothmuscle-myosinheavychain,SM-MHC)、Calponin进行检测，Westernblot检测α-SMA蛋白、Calponin蛋白在BMSCs中的表达,并用微球菌核酸酶(micrococcalnuclease,MNase)对平滑肌3个标志性基因的启动子区进行了染色质开放性的检测，同时运用了ChIP技术分析了α-SMA、SM-MHC启动子区组蛋白乙酰化水平对BMSCs向平滑肌分化的影响。结果大鼠原代BMSCs流式检测显示CD29表达阳性,阳性率为99.8%,CD31、CD45表达阴性，阳性率为6.30%、1.04%；免疫荧光显示平滑肌3种标志性蛋白的表达均随时间的延长而增加；Westernblot结果显示随着共培养天数的增加α-SMA蛋白、Calponin蛋白在实验组中的表达相比对照组有明显的增加；MNase显示实验组的BMSCs启动子区染色质对核酸酶的敏感性明显高于对照组，ChIP显示实验组中BMSCs平滑肌标志性基因α-SMA、SM-MHC、Calponin启动子区H4乙酰化水平较未分化前明显增加(P<0.05)。结论组蛋白乙酰化程度的增加促进了BMSCs向BSMCs分化。