双链腺相关病毒介导表达Exendin-4治疗糖尿病大鼠的研究

目的构建、鉴定自身互补双链DNA的腺相关病毒（scAAV）重组载体，使其分泌表达Exendin-4，检测其转导效率并观察在糖尿病大鼠模型中的治疗作用。方法应用基因工程方法改建穿梭质粒pSSHG-CMV，插入外源性基因Exendin-4，构建重组scAAV载体，感染HEK293细胞，ELISA检测转染NIH3T3细胞上清Exendin-4滴度，链佐霉素诱导20只6周龄体质量180～220gSD成年雄性大鼠为糖尿病鼠模型，逆向注射重组scAAV于糖尿病大鼠颌下腺，检测其血糖及胰岛素分泌水平。结果重组scpSSHG/exn4可有效包装和复制，病毒滴度为2.5×1011pfu/mL，转染细胞上清分泌Exendin-4浓度可达到4.53ng/mL，scAAV治疗组血糖浓度在2、4周及8周均低于对照组[分别为(639.17±27.89)vs(396.00±34.00)，(657.02±39.87)vs(315.62±42.56)，(215.6±24.7)vs(458.6±19.7)mg/dL]，胰岛素浓度均高于对照组[分别为(156.8±24.5)vs(535.9±35.6)，(236.5±12.3)vs(495.3±18.6)，(620.43±46.90)vs(381.56±21.78)pg/mL]，二者比较有显著统计学差异(P<0.05)。结论成功构建重组双链腺伴病毒scAAV-Ex-4，具有高效转导能力，对糖尿病大鼠模型具有控制血糖及增加胰岛素分泌作用。