重组慢病毒介导人凝血Ⅸ因子基因感染HUCMSCs的实验研究

目的探讨慢病毒介导人凝血Ⅸ因子（humanclottingfactorⅨ，hFⅨ）感染人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，hUCMSCs）后hFⅨ的表达情况。方法重组构建慢病毒载体GV240-hFⅨ-EGFP。以脂质体介导法共转染293T细胞包装生产慢病毒。以不同感染复数（multipleofinfection，MOI)感染hUCMSCs，荧光显微镜观察细胞感染效率，流式细胞仪检测验证。以最适MOI感染hUCMSCs，RT-PCR检测hFⅨmRNA水平,ELISA检测FⅨ蛋白含量（FⅨ∶Ag)及一期法检测FIX凝血活性(FⅨ∶C)。结果制备出了滴度为2×108TU/mL的重组慢病毒。MOI=10时能高效感染hUCMSCs，感染效率为（92.92±6.32）%。RT-PCR结果示只有转染组有hFⅨmRNA转录。感染后1d，hUCMSCs即可有效分泌hFⅨ，在5d时达到最高峰，FⅨ∶Ag为（87.18±0.86）ng/(106？24h)，FⅨ∶C为(44.3±3.2)%，高水平分泌可至少持续29d。结论重组GV240-hFⅨ-EGFP慢病毒感染hUCMSCs后能持续高水平分泌具有凝血功能活性的hFⅨ蛋白。