骨髓瘤细胞表达APE1促进THP-1细胞破骨样分化

目的研究在非接触式共培养体系下，RNA干扰多发性骨髓瘤细胞株U266APE1表达对与其共培养的THP-1细胞破骨样分化的影响。方法①将构建的APE1siRNA表达载体导入U266细胞中。②Westernblot法检测U266细胞中APE1及破骨细胞分化因子（RANKL）蛋白表达。③建立非接触式共培养体系：THP-1+U266共培养组、THP-1+U266APE1siRNA共培养组和THP-1细胞单培养组。④抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色鉴定破骨样细胞，RT-PCR法检测THP-1细胞CathepsinK和V-ATPasemRNA表达水平。⑤光镜下观察骨切片陷窝形成。结果APE1siRNA能明显抑制U266细胞中APE1及RANKL蛋白表达（P<0.01）。THP-1细胞与U266细胞共培养后，THP-1细胞可分化为TRAP阳性的破骨样细胞，CathepsinK和V-ATPase基因表达显著升高（P<0.05）；U266细胞经APE1siRNA处理后，共培养体系中THP-1细胞诱导分化的OCLs数量减少，CathepsinK和V-ATPase基因水平降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论APE1siRNA能明显抑制U266细胞诱导的THP-1细胞的破骨样分化，其机制可能与APE1下调U266细胞RANKL有关。