丙型肝炎病毒核心蛋白对Dicer切割功能的影响

目的探讨核心蛋白与Dicer的相互作用及其对Dicer功能的影响。方法构建丙型肝炎病毒核心蛋白真核表达质粒，采用免疫荧光染色和Westernblot检测核心蛋白的表达，Westernblot检测核心蛋白对细胞内Dicer表达的影响，免疫共沉淀技术检测真核细胞内核心蛋白与Dicer的相互作用。体外转录合成dsRNA，检测核心蛋白对Dicer切割dsRNA作用的影响。结果在细胞内，核心蛋白能够明显恢复被shRNA抑制的虫荧光素酶基因的表达（P<0.05），而对siRNA引发的RNAi无拮抗作用。在真核细胞内，加入核心蛋白后，Dicer的表达量无明显改变，并能检测到两者相互结合。在体外抑制实验中，重组表达的Dicer能切割dsRNA产生siRNA；核心蛋白加入后，dsRNA的切割受到抑制。结论核心蛋白在真核细胞内可以结合Dicer,并通过抑制Dicer对dsRNA的切割作用，抑制RNA干扰作用。