大鼠骨髓间充质干细胞与脱细胞脊髓支架体外共培养

目的评价脱细胞脊髓支架在大鼠骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)体外培养中的作用，探索最佳接种浓度。方法分离、培养及鉴定SD大鼠BMSCs，诱导BMSCs向神经元样细胞分化。制备脱细胞脊髓支架，将第3代BMSCs同脱细胞脊髓支架共培养，MTT法检测细胞增殖活性，比较与普通培养的差异；取第3代BMSCs以不同浓度[（0.5、1、2、3、4）×106/mL]接种于支架（脊髓支架修整0.5cm小段），检测细胞在支架上的粘附率及上架细胞数，建立接种浓度与细胞粘附率、上架细胞数的关系回归方程；扫描电镜观察脱细胞脊髓支架形态以及细胞与支架的粘附情况。结果成功实现BMSCs的分离及培养，BMSCs流式鉴定CD29、CD90阳性表达，向神经元诱导胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、巢蛋白（Nestin）呈阳性表达；与普通培养相比，BMSCs在支架上细胞增殖活力显著提高（P<0.05）；细胞与支架的粘附率在接种浓度为2×106/mL最高，达到(79.6±2.7)%，单位体积上架细胞数达到（1.364±0.047）×106/cm3；扫描电镜观察支架空间结构良好，细胞与支架粘附良好，共培养第3天较第1天细胞数量明显增加。结论脱细胞脊髓支架具有多通道的空间结构，适合BMSCs粘附、存活、增殖，该支架是良好的天然脊髓组织工程材料。当粘附率及细胞上架数基本达到最大时的最佳接种浓度为2×106/mL。