人STAT3重组腺病毒的制备及其对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响

目的　　　制备可表达人转录因子STAT3的重组腺病毒，检测该基因在胃癌细胞株SGC-7901的表达活性及对其增殖的影响。　　　方法　　　以人胎盘组织cDNAs为模板通过PCR获得hSTAT3完整阅读框，T/A克隆测序证实后，亚克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中，PmeⅠ线性化与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在BJ5183细菌同源重组，经PacⅠ线性化后转染293FT细胞包装，同时包装空载体腺病毒，进行病毒滴度测定。取AdV-STAT3、AdV-GFP分别感染SGC-7901细胞，设空白对照，Westernblot检测3组细胞STAT3蛋白表达，MTT法检测对细胞增殖的影响。　　　结果　　　获得hSTAT3完整阅读框，T载体中测序无突变，亚克隆至pAdTrack-CMV，并与pAdEasy-1成功重组后包装AdV-STAT3，测定滴度为2.8×1010pfu/mL，AdV-GFP滴度为3.2×1010pfu/mL。与AdV-GFP组及空白对照组比，Westernblot示AdV-STAT3组蛋白明显表达（P<0.05）；MTT示AdV-1-STAT3组明显促进细胞增殖（P<0.05）。　　　结论　　　成功制备hSTAT3的重组腺病毒，感染胃癌细胞株SGC-7901后高表达并促进其增殖。