Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响

目的探讨Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响。方法将细胞分为4组：阴性对照组(即空白组)、实验对照组(感染Ad-GFP组)、阳性对照组(50ng/mlRANKL诱导组)、实验组(感染Ad-Wnt3a组)。分别给予处理因素后常规细胞培养6d，通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞的分化成熟情况；Westernblot检测TRAP、CathepsinK蛋白的表达；分别于处理因素后3、6、9d提取细胞总RNA，荧光定量Realtime(RT-PCR)检测核因子κB受体（RANK）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、组织蛋白酶K(CathepsinK)、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）基因的表达。结果TRAP染色显示50ng/mLRANKL诱导组能成功诱导RAW264.7成多核（核≥10），空白组和Ad-GFP组有少量多核细胞（3≤核≤5）,Ad-Wnt3a组为单核有个别双核；Westernblot检测显示Ad-Wnt3a组TRAP、CathepsinK蛋白表达降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；RT-PCR检测Ad-Wnt3a组能下调RANK、TRAP、CathepsinK、MMP-9基因的表达。结论Wnt3a能抑制RAW264.7分化成成熟的破骨细胞。