HBV人工转录因子与拉米夫定抗HBV作用的比较研究

目的构建特异性结合乙型肝炎病毒X基因启动子（HepatitisBvirusXpromoter,HBVXp）的人工转录因子真核表达载体，并与拉米夫定（3TC）体外抗乙肝病毒效果进行比较研究。方法利用Zinefingertools3.0软件设计特异性结合HBVXp的锌指蛋白(zincfingerprotein，ZFP)并融合抑制性效应结构域kRAB，全基因合成后载入真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建重组质粒pcDNA3.1(+)-nls-ZFP-kRAB-Flag(ATF)、pcDNA3.1(+)-nls-ZFP-Flag(ZFP1)、pcDNA3.1(+)-nls-kRAB-Flag(ZFP2)，通过酶切、测序鉴定重组质粒的正确性，Westernblot和细胞免疫荧光鉴定重组质粒在HepG2细胞表达情况。将重组质粒转染HepG2.2.15细胞，设空白组（Blank组）、ATF组、ZFP1组、ZFP2组、空质粒组（Emptyvector组）和拉米夫定组（3TC组），分别培养2、6、10d，用Westernblot、FQ-PCR、ELISA分别检测各组HBx蛋白、HBVDNA、上清中HBsAg和HBeAg的表达情况。结果重组质粒成功构建且能在HepG2细胞中表达；ATF组抑制HepG2.2.15细胞中X蛋白和HBVDNA的表达，与其余各组相比差异有统计学意义（P<0.05），且6d和10d抑制作用强于2d；3TC组亦能抑制HepG2.2.15细胞中X蛋白和HBVDNA的表达（P<0.05）。ATF组能抑制上清中HBsAg，HBeAg的分泌，与其余各组相比差异有统计学意义（P<0.05）；3TC组亦能抑制上清中HBsAg，HBeAg的分泌（P<0.05）。结论人工设计的特异性ATF在真核细胞中能正常表达，并能有效发挥抑制HBV的作用，且抑制作用强于拉米夫定。