利用精子特异性抗体SPAG8分离混合细胞体系中的精子

目的利用精子特异性抗体SPAG8（Spermassociatedantigen8）结合免疫磁珠技术分离混合细胞系中的精子，建立混合斑中精子细胞分离的新方法。方法制备含有精子103、104、105/mL与阴道上皮细胞104/mL的3种混合悬液各10例，各样本制作混悬液及模拟混合斑各2份，分别以生物素标记的SPAG8单克隆抗体孵育特异结合混合悬液及混合斑中的精子，然后用亲和素包被的免疫磁珠通过生物素-亲和素复合体捕获分离精子细胞，提取精子DNA进行STR复合扩增和DNA分型检测，同时以差异裂解法检测混悬液及混合斑中的精子进行方法比较。结果免疫磁珠-亲和素-生物素-抗体复合物可分离混合细胞体系中的精子，当混合悬液内的精子数量达到103/mL时，90%的样本可得到13个STR基因座的单一男性分型，精子数量达到104/mL时，90%的样本均可得到16个STR基因座的单一男性分型；含有104/mL以上数量精子的混悬液制作的混合斑，单一男性13个STR基因座的正确分型率达80%以上，混悬液及混合斑的免疫磁珠法有效STR检出率高于传统的差异裂解法。结论本方法简便快捷，可作为混合斑法医学检验的有效补充手段。